Забруджванне клеткавых культур можа лёгка стаць самай распаўсюджанай праблемай у лабараторыях клетачных культур, часам выклікаючы вельмі сур'ёзныя наступствы.Забруджвальнікі культуры клетак можна падзяліць на дзве катэгорыі: хімічныя забруджвальнікі, такія як прымешкі асяроддзя, сыроваткі і вады, эндатаксіны, пластыфікатары і мыйныя сродкі, і біялагічныя забруджвальнікі, такія як бактэрыі, цвілі, дрожджы, вірусы, перакрыжаваная інфекцыя мікоплазмамі.Заражаны іншымі клеткавымі лініямі.Нягледзячы на тое, што цалкам ліквідаваць забруджванне немагчыма, яго частату і сур'ёзнасць можна паменшыць, дасканала разумеючы яго крыніцу і выконваючы належныя метады асептыкі
1. У гэтым раздзеле выкладзены асноўныя віды біялагічнага забруджвання:
Бактэрыяльнае заражэнне
Заражэнне цвіллю і вірусамі
Заражэнне мікоплазмой
Дражджавое заражэнне
1.1 Бактэрыяльнае заражэнне
Бактэрыі - гэта вялікая група паўсюдна распаўсюджаных аднаклетачных мікраарганізмаў.Звычайна яны маюць усяго некалькі мікрон у дыяметры і могуць мець розныя формы, ад шароў да стрыжняў і спіраляў.З-за сваёй паўсюднасці, памеру і хуткага росту бактэрыі разам з дрожджамі і цвіллю з'яўляюцца найбольш распаўсюджанымі біялагічнымі забруджвальнікамі ў культуры клетак.
1.1.1 Выяўленне бактэрыяльнага заражэння
Бактэрыяльнае заражэнне лёгка выяўляецца пры візуальным аглядзе культуры на працягу некалькіх дзён пасля яе заражэння;
Заражаныя культуры звычайна выглядаюць мутнымі (г.зн. каламутнымі), часам з тонкай плёнкай на паверхні.
Таксама часта сустракаюцца раптоўныя падзенні pH пажыўнай асяроддзя.
Пад мікраскопам нізкай магутнасці бактэрыі выглядаюць як малюсенькія гранулы, якія рухаюцца паміж клеткамі, і назіранне пад мікраскопам высокай магутнасці можа вызначыць форму асобных бактэрый.
1.2 Заражэнне цвіллю і вірусам
1.2.1 Заражэнне цвіллю
Цвіль - гэта эукарыятычныя мікраарганізмы царства грыбоў, якія растуць у выглядзе шматклетачных нітак, якія называюцца гіфамі.Злучальныя сеткі гэтых мнагаклетачных нітак утрымліваюць генетычна ідэнтычныя ядра, якія называюцца калоніямі або міцэліем.
Падобна дражджавому забруджванню, pH культуры застаецца стабільным на працягу пачатковай фазы заражэння, а затым хутка павялічваецца, калі культура становіцца больш сур'ёзна заражанай і становіцца каламутнай.Пад мікраскопам міцэлій звычайна ніткападобны, часам у выглядзе шчыльных навал спрэчка.Спрэчкі многіх цвілевых грыбоў могуць выжываць у надзвычай суровых і непрыветлівых умовах падчас фазы спакою і актывізуюцца толькі тады, калі ствараюцца належныя ўмовы росту.
1.2.2 Віруснае заражэнне
Вірусы - гэта мікраскапічныя інфекцыйныя агенты, якія захопліваюць механізмы размнажэння клеткі-гаспадара.Іх надзвычай малы памер робіць іх цяжкімі для выяўлення ў культуры і выдалення з рэагентаў, якія выкарыстоўваюцца ў лабараторыях культуры клетак.Паколькі большасць вірусаў прад'яўляюць вельмі строгія патрабаванні да сваіх гаспадароў, яны звычайна не аказваюць негатыўнага ўплыву на культуры клетак іншых відаў, акрамя гаспадара.
Аднак выкарыстанне заражаных вірусам культур клетак можа прадстаўляць сур'ёзную небяспеку для здароўя лабараторнага персаналу, асабліва калі клеткі чалавека або прымата вырошчваюцца ў лабараторыі.
Вірусную інфекцыю ў культурах клетак можна выявіць з дапамогай электроннай мікраскапіі, імуннага афарбоўвання з наборам антыцелаў, ІФА або ПЦР з адпаведнымі віруснымі праймерамі.
1.3 Заражэнне мікоплазмой
Мікоплазмы - гэта простыя бактэрыі без клеткавых сценак, і яны лічацца самымі маленькімі самаразмножвальнымі арганізмамі.З-за надзвычай малых памераў (звычайна менш за 1 мікрон) мікоплазмы цяжка выявіць, пакуль яны не дасягнуць надзвычай высокай шчыльнасці і не прывядуць да пагаршэння культуры клетак;Да гэтага часу відавочных прыкмет інфекцыі звычайна няма.
1.3.1 Выяўленне мікоплазменной кантамінацыі
Некаторыя павольна растуць мікоплазмы могуць захоўвацца ў культурах, не выклікаючы гібелі клетак, але яны змяняюць паводзіны і метабалізм клетак гаспадара ў культурах.
Хранічная мікоплазменные інфекцыя можа характарызавацца зніжэннем хуткасці праліферацыі клетак, зніжэннем шчыльнасці насычэння і аглютынацыі ў суспензійнай культуры.
Тым не менш, адзіны надзейны спосаб выявіць заражэнне мікоплазмай - гэта рэгулярнае даследаванне культуры з дапамогай флюарэсцэнтнага афарбоўвання (напрыклад, Hoechst 33258), ІФА, ПЦР, імуннага афарбоўвання, аўтарыяграфіі або мікробнага тэставання.
1.4 Забруджванне дрожджамі
Дрожджы - гэта аднаклетачныя эўкарыёты царства грыбоў, памер якіх вар'іруецца ад некалькіх мікрон (звычайна) да 40 мікрон (рэдка).
1.4.1 Выяўленне дражджавога забруджвання
Як і ў выпадку з бактэрыяльным заражэннем, культуры, заражаныя дрожджамі, могуць памутнець, асабліва калі заражэнне знаходзіцца на запушчанай стадыі.pH культур, забруджаных дрожджамі, змяняецца вельмі нязначна, пакуль забруджванне не стане больш сур'ёзным, на гэтай стадыі pH звычайна павялічваецца.Пад мікраскопам дрожджы выглядаюць як асобныя яйкападобныя або сферычныя часціцы і могуць вырабляць больш дробныя часціцы.
2.Перекрыжаванае заражэнне
Хаця і не так часта, як мікробнае заражэнне, шырокае перакрыжаванае заражэнне многіх клеткавых ліній HeLa і іншымі клеткавымі лініямі, якія хутка растуць, з'яўляецца выразна вызначанай праблемай з сур'ёзнымі наступствамі.Атрымлівайце клетачныя лініі ў надзейных клеткавых банках, рэгулярна правярайце характарыстыкі клеткавых ліній і выкарыстоўвайце добрыя метады асептыкі.Гэтыя практыкі дапамогуць вам пазбегнуць перакрыжаванага заражэння.Дактыласкапія ДНК, карыатыпаванне і ізатыпаванне могуць пацвердзіць, ці існуе перакрыжаванае заражэнне вашай клетачнай культуры.
Хаця і не так часта, як мікробнае заражэнне, шырокае перакрыжаванае заражэнне многіх клеткавых ліній HeLa і іншымі клеткавымі лініямі, якія хутка растуць, з'яўляецца выразна вызначанай праблемай з сур'ёзнымі наступствамі.Атрымлівайце клетачныя лініі ў надзейных клеткавых банках, рэгулярна правярайце характарыстыкі клеткавых ліній і выкарыстоўвайце добрыя метады асептыкі.Гэтыя практыкі дапамогуць вам пазбегнуць перакрыжаванага заражэння.Дактыласкапія ДНК, карыатыпаванне і ізатыпаванне могуць пацвердзіць, ці існуе перакрыжаванае заражэнне вашай клетачнай культуры.
Час публікацыі: 1 лютага 2023 г