Адной з галоўных пераваг клетачнай культуры з'яўляецца магчымасць маніпуляваць фізічнай хіміяй размнажэння клетак (напрыклад, тэмпературай, pH, асматычным ціскам, напругай O2 і CO2) і фізіялагічным асяроддзем (напрыклад, канцэнтрацыяй гармонаў і пажыўных рэчываў).У дадатак да тэмпературы культурнае асяроддзе кантралюецца асяроддзем росту.
Хаця фізіялагічнае асяроддзе культуры не такое зразумелае, як яе фізічнае і хімічнае асяроддзе, лепшае разуменне кампанентаў сыроваткі крыві, ідэнтыфікацыя фактараў росту, неабходных для праліферацыі, і лепшае разуменне мікраасяроддзя клетак у культуры.(Г.зн. міжклеткавае ўзаемадзеянне, дыфузія газу, узаемадзеянне з матрыцай) цяпер дазваляе культываваць пэўныя клетачныя лініі ў бессыроватачных асяроддзях.
1. Культурнае асяроддзе ўплывае на рост клетак
Звярніце ўвагу, што ўмовы культывавання клетак розныя для кожнага тыпу клетак.
Наступствы адхілення ад умоў культывавання, неабходных для пэўнага тыпу клетак, вар'іруюцца ад экспрэсіі анамальных фенатыпу да поўнага адмовы культуры клетак.Такім чынам, мы рэкамендуем вам азнаёміцца з лініяй клетак, якая вас цікавіць, і строга прытрымлівацца інструкцый, прадстаўленых для кожнага прадукту, які вы выкарыстоўваеце ў сваім эксперыменце.
2. Меры засцярогі для стварэння аптымізаванага асяроддзя культуры клетак для вашых клетак:
Культуральныя асяроддзя і сыроватка (дадатковую інфармацыю глядзіце ніжэй)
Ўзроўні pH і CO2 (дадатковую інфармацыю глядзіце ніжэй)
Вырошчвайце пластык (дадатковую інфармацыю глядзіце ніжэй)
Тэмпература (дадатковую інфармацыю глядзіце ніжэй)
2.1 Культуральная серада і сыроватка
Культуральная серада з'яўляецца найбольш важнай часткай асяроддзя культывавання, таму што яна забяспечвае пажыўныя рэчывы, фактары росту і гармоны, неабходныя для росту клетак, і рэгулюе pH і асматычны ціск культуры.
Нягледзячы на тое, што першапачатковыя эксперыменты па культуры клетак праводзіліся з выкарыстаннем натуральных асяроддзяў, атрыманых з тканкавых экстрактаў і вадкасцей арганізма, неабходнасць стандартызацыі, якасці асяроддзя і павелічэнне попыту прывялі да распрацоўкі канчатковых асяроддзяў.Тры асноўныя тыпы асяроддзяў - гэта базальныя асяроддзя, асяроддзя з адноўленай сыроваткай і бессыроватачныя асяроддзя, і яны маюць розныя патрабаванні да сыроваткі.
2.1.1 Асноўнае асяроддзе
Асяроддзе для культывавання клетак Gibco
Большасць клеткавых ліній добра растуць у асноўных асяроддзях, якія змяшчаюць амінакіслоты, вітаміны, неарганічныя солі і крыніцы вугляроду (напрыклад, глюкозу), але гэтыя склады асноўных асяроддзяў неабходна дапаўняць сыроваткай.
2.1.2 Адноўленае сыроватачна асяроддзе
Бутэлька з Gibco Low Serum Medium
Іншая стратэгія памяншэння пабочных эфектаў сыроваткі ў эксперыментах з культурай клетак - выкарыстанне асяроддзяў з паніжаным утрыманнем сыроваткі.Сыроватачная серада з паніжаным узроўнем - гэта асноўная формула асяроддзя, багатая пажыўнымі рэчывамі і фактарамі жывёльнага паходжання, што можа паменшыць колькасць неабходнай сыроваткі.
2.1.3 Бессывороточная серада
Бутэлька з бессыроватачнай асяроддзем Gibco
Бессыроватачнае асяроддзе (SFM) дазваляе абыйсці выкарыстанне сыроваткі жывёл шляхам замены сыроваткі адпаведным харчаваннем і гарманальнымі складамі.Многія першасныя культуры і клетачныя лініі маюць бессыроватачныя склады асяроддзя, у тым ліку лінію вытворчасці рэкамбінантнага бялку яечнікаў кітайскага хамяка (CHO), розныя лініі клетак гібрыдомы, лініі насякомых Sf9 і Sf21 (Spodoptera frugiperda), а таксама для гаспадара для вытворчасці віруса (напрыклад, 293, VERO, MDCK, MDBK) і г. д. Адным з галоўных пераваг выкарыстання бессыроватачнай асяроддзя з'яўляецца магчымасць зрабіць сераду селектыўнай для пэўных тыпаў клетак шляхам выбару адпаведнай камбінацыі фактараў росту.У наступнай табліцы пералічаны перавагі і недахопы бессыроватачных асяроддзяў.
Перавага
Павысіць яснасць
Больш стабільная прадукцыйнасць
Больш простая ачыстка і наступная апрацоўка
Дакладна ацаніць функцыю клетак
Павышэнне прадукцыйнасці
Лепшы кантроль фізіялагічных рэакцый
Палепшанае выяўленне сотавых носьбітаў
Недахоп
Спецыфічныя для тыпу клеткі патрабаванні да сярэдняй формулы
Патрэбна больш высокая чысціня рэагентаў
Запаволенне росту
2.2.1 Узровень pH
Большасць нармальных клеткавых ліній млекакормячых добра растуць пры pH 7,4, і адрозненні паміж рознымі клеткавымі лініямі невялікія.Аднак было паказана, што некаторыя трансфармаваныя клеткавыя лініі лепш растуць у слабакіслым асяроддзі (pH 7,0 - 7,4), у той час як некаторыя нармальныя клетачныя лініі фібрабластаў аддаюць перавагу слабашчолачныя асяроддзі (pH 7,4 - 7,7).Клеткавыя лініі насякомых, такія як Sf9 і Sf21, лепш растуць пры pH 6,2.
2.2.2 Узровень CO2
Асяроддзе росту кантралюе pH культуры і буферызуе клеткі ў культуры, каб супрацьстаяць зменам pH.Звычайна гэта буферызацыя дасягаецца шляхам утрымання арганічных (напрыклад, HEPES) або буфераў на аснове бікарбанату CO2.Паколькі pH асяроддзя залежыць ад далікатнага балансу растворанага вуглякіслага газу (CO2) і бікарбанату (HCO3-), змены ў атмасферным CO2 будуць змяняць pH асяроддзя.Такім чынам, пры выкарыстанні асяроддзя, забуференной буферам на аснове CO2-бікарбанату, неабходна выкарыстоўваць экзагенны CO2, асабліва пры культываванні клетак у адкрытых культуральных чашках або культываванні трансфармаваных клеткавых ліній у высокіх канцэнтрацыях.Хаця большасць даследчыкаў звычайна выкарыстоўваюць 5-7% CO2 у паветры, большасць эксперыментаў з культурай клетак звычайна выкарыстоўваюць 4-10% CO2.Тым не менш, кожнае асяроддзе мае рэкамендаванае напружанне CO2 і канцэнтрацыю бікарбанату для дасягнення правільнага рн і асматычнага ціску;для атрымання дадатковай інфармацыі, калі ласка, звярніцеся да інструкцый вытворцы носьбіта.
2.3 Вырошчванне пластмас
Пластыкі для клетачнай культуры даступныя ў розных формах, памерах і паверхнях, каб задаволіць розныя прымянення клетачнай культуры.Каб дапамагчы вам выбраць правільны пластык для прымянення ў культуры клетак, выкарыстоўвайце кіраўніцтва па паверхні пластыка для культуры клетак і кіраўніцтва па ёмістасці для культуры клетак.
Паглядзець усе пластмасы для культуры клетак Thermo Scientific Nunc (рэкламная спасылка)
2.4 Тэмпература
Аптымальная тэмпература для культуры клетак у значнай ступені залежыць ад тэмпературы цела гаспадара, ад якога вылучаюцца клеткі, і ў меншай ступені ад анатамічных змяненняў тэмпературы (напрыклад, тэмпература скуры можа быць ніжэй, чым тэмпература шкілетных цягліц ).Для культуры клетак перагрэў з'яўляецца больш сур'ёзнай праблемай, чым перагрэў.Таму тэмпературу ў інкубатары звычайна выстаўляюць крыху ніжэй аптымальнай.
2.4.1 Аптымальная тэмпература для розных клеткавых ліній
Большасць клеткавых ліній чалавека і млекакормячых захоўваюць пры тэмпературы ад 36°C да 37°C для аптымальнага росту.
Клеткі насякомых культывуюцца пры 27°C для аптымальнага росту;яны растуць павольней пры больш нізкіх тэмпературах і тэмпературах ад 27°C да 30°C.Вышэй за 30°C жыццяздольнасць клетак насякомых зніжаецца, нават калі яна вернецца да 27°C, клеткі не адновяцца.
Для дасягнення максімальнага росту клеткавым лініям птушак патрэбна тэмпература 38,5°C.Хоць гэтыя клеткі можна захоўваць пры тэмпературы 37°C, яны будуць расці павольней.
Клеткавыя лініі, атрыманыя ад халоднакроўных жывёл (такіх як амфібіі, халоднаводныя рыбы), могуць пераносіць шырокі дыяпазон тэмператур ад 15°C да 26°C.
Час публікацыі: 1 лютага 2023 г